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使用Elisa试剂盒时可能遇到的问题有哪些
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  使用Elisa试剂盒时可能遇到的问题如下:
  试剂盒平衡问题,试剂盒中所有试剂和板条均应在试验前平衡至室温,一般需在室温放置20-30分钟以上。平衡时间太短会造成试剂混匀不够,样品孵育时间相对缩短,ELISA反应不够充分。冬季室温低,可将试剂盒置37℃的温箱20分钟。
  加样速度的问题,在现在的ELISA商品试剂盒中,必然有使用微量加样器加入样本的步骤。注意加样不可太快,要避免加在孔壁上部,不可溅出和产生气泡。加样太快,无法保证微量加样的准确性和均一性。加在孔壁上部的非包被区,易导致非特异吸附。溅出会对邻近孔产生污染。出现气泡则反应液界面有差异。所以,有时候一份标本用相同的试剂盒这次测定为阳性,下次测定为阴性,往往就是上述加样及试剂的错误所致。
  样品稀释问题,酶联免疫反应是一种敏感性很高的反应,如果血清不稀释,不可避免会产生很强的非特异性反应,出现假阳性。检测血清抗体的试剂盒,均规定将血清稀释至适当的倍数,以降低非特异性反应,使特异性的抗原抗体反应充分体现出来。一般产品的样品稀释倍数均通过大量试验确定,以保证试验的灵敏度和特异性。但有些用户未能严格按使用说明书操作,如某些产品应取10μl样品进行稀释,个别用户取5μl甚至1μl样品进行稀释,由于吸嘴上不可避免地沾有样品以及微量移液器的精度不够,因此造成样品稀释倍数不准确,检测结果出现问题。
  将不同厂家的试剂混用在Elisa试剂盒的问题,不同方法学的检测试剂,会使两对半结果出现一些不同。例如:在实际工作中常用ELISA检测HBsAg结果为阴性,而电化学发光检测为阳性。除方法学的灵敏度外,还存在使用单抗或多克隆抗体试剂的差别。单抗对变异抗原或亚型标志物检测存在差异,建议试剂厂家对剂的制备应该考虑亚型及型浓度的问题。
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